多种探针标记检测系统
基于地高3辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。
荧光标记检测常为直接探针标记方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上连接Fluorescein后进行核酸标记。由于标记在核酸上的荧光分子必须经受杂交和洗脱过程中的考验，以及荧光分子易于衰减，其检测灵敏度受到一定的影响。但对荧光分子的直接检测呈现的背景较低。
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或***切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精3确定量***的过程。原位杂交可以在细胞标本或***标本上进行。
原位杂交技术(In situ hybridization，ISH)是分子生物学、***化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术，始于20世纪60年代。
原位PCR；原位杂交细胞***和PCR的高灵敏度相结合的技术，在细胞（爬片、甩片或涂片）或***（石蜡、冰冻切片）上直接对靶***片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。
杂交技术***重要的因素之一是选择***适的杂交反应温度。若反应温度低于Tm 10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少。若反应温度再低（Tm-30℃），虽然互补链之间也可形成稳定的双链，但互补碱基配对减少，原位杂交***，错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或更低些的DNA，调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍，因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验，即***适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。
***适复性温度（Optimunm renaturation temperature， TOR）：Tor =Tm –25℃
苛刻复性温度：Ts = Tm – (10或15℃)
非苛刻复性温度：Tns =Tm – (30或35℃)
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