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细胞冻存步骤

1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍;

2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化;

3.待消化到位后加入适量血浆或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min;

4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL，转移到冻存管中;

5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。

6.冻存细胞后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，

为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存

冻存袋使用注意事项

1.  取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致。

2.  冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，200-074-400冻存袋价格，但二亚砜（DMSO）对细胞不是完全，在常温下，CS50冻存袋价格，二亚砜对细胞的毒副作 较大，冻存袋价格，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二亚砜（DMSO）选择进口产品。

3.  离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。

冻存袋的背景知识

采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或二亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。