北京思齐生物公司-200-074-400冻存袋供应商

细胞冻存步骤

1.用移液器吸走原培养基，200-074-400冻存袋供应商，加入适量PBS洗1-2遍;

2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化;

3.待消化到位后加入适量血浆或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min;

4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL，转移到冻存管中;

5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。

6.冻存细胞后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，

为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存

冻存袋的背景知识

采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或二亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，CS250冻存袋供应商，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。

冻存袋方法的改进

自1977年以来，我们应用四级梯度降温冻存法对30余株哺乳动物细胞及2株节肢动物细胞共1000多支安瓶进行了冷冻保存，200-074-401冻存袋供应商，效果较好，大部分细胞的活存率在70%以上。在此基础上对8株抗登革4型(DEN一4)病毒杂交瘤细胞400多支安靓进行了冻存。鉴于四级降温冻存法步骤多，需要经过4℃冰箱和一20℃冰箱长达7~8小时的梯度降温，冻存袋供应商，较难适应单工作中细胞冻存的需要。因此，自1982年以来我们摸索了影响细胞冻存的主要因素，确定了杂交瘤细胞冻存的适保护剂浓度(1.2〕，并研制成功细胞冻存简易装置。