冻存袋技术
是将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一,起到了细胞保种的作用。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。
冻存袋的作用
适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二亚砜(DMSO),可使溶液冰点降低,加之在缓慢***条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。
细胞冻存的方法
1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。
2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,冻存袋批发,令细胞密度达5×106/ml,离心去上清,吸入离心管中。
3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液,CS50冻存袋批发,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。
4.分装:分装入无菌安剖中,每安剖加1.5毫升细胞悬液。
5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后,仔细检查,定要封严,必要时可浸入蓝色液中观察,为安全起见,把安剖缝入纱布小袋中,CS250冻存袋批发,以防液氮浸入后,融解时因受热发生伤人;纱袋一端系以线绳,末端扎有小牌,CS250冻存袋批发,注明:细胞名称,冻存日期,以便日后查找。
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