CS50冻存袋供应商-冻存袋供应商-北京思齐生物有限公司

细胞冻存复苏方法

1.  细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。

2.  培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱37°C预热20min，备用。

3.  二亚砜（DMSO)在40°C冰箱中冷藏30min，备用。

4.  从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400°C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。

5.  将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，冻存袋供应商，离心（1000r/min，5min）。

6.  用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。

7.  记录复苏日期。

细胞冻存步骤

（1）将标本编号，并用Marker笔仔细标注于冻存管管盖及管壁上，同时将每管编号、内容物、取材日期记录于登记本上。

（2）将冻存管装入冻存袋，戴上棉线手套和防护面罩，迅速放入液氮罐中30～60秒速冻，200-074-401冻存袋供应商，至冻存***完全冻住，取出待液氮完全挥发（注意动作轻柔，避免液氮溅洒）。

（3）将经液氮速冻后的***放入-80℃冰箱相应编号盒中，长期保存。

（4）取材完毕后，将剩余新鲜标本浸泡于10%中尔马林液中固定（切记不要拿错病理号），做好和当日冰冻值班医生的交接，200-074-400冻存袋供应商，避免遗漏。

（5）清洗取材台及取材器具，器具需用消毒液完全浸泡10～15min，清水冲洗后擦干置于干燥处保存备用，取材器具应定期高温消毒。

冻存袋注意事项

1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态，约为80~90%致密度。

冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有antibody之产生。

2.细胞在液氮中可长期冻存没有时间限制，而不会影响细胞活力﹔在-70度可保存数月。注意冷冻保护剂之品质。

DMSO应为***级等级，无菌且无色是直接购买无菌产品，以5~10m1小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。

3.冻存细胞数量要足够。无论再怎么小心，细胞在冷冻和复苏过程中总会死掉一批的。所以，一开始冻存细胞的数量要足够。一般要达到5× 10^6 /毫升，一瓶不够两瓶凑。但是，这个不能一概而论。有些细胞，比如杂交瘤细胞，只需要1-3x 10^6 /毫升