核酸共沉剂-武汉友名生物公司(图)

如何评价和选择支原体检测***盒

1. 灵敏度。

灵敏度常用支原体***组的拷贝数或支原体菌株的CFU表示。

2. 特异性和广谱性。

质量好的***盒应检测的支原体物种越多越多，并且特异性强，即只针对支原体，不针对其他***等微生物，没有交叉反应。

3. 稳定性。

冻干粉比液体***的稳定性高。

4. 样本类型及样本处理。

一款好的***盒，会标出它适合的样本类型，也会说明如何处理样本。要注意有的样本含有***PCR反应的物质，因此需要处理。

5. 对照品。

一个好的***盒，会带有阳性对照和内控对照。内控对照是用于监测PCR是否正常。如果样本含有***PCR的物质，则内控对照的条带会发生缺失。有严重支原体污染的样本由于样本中的支原体对内控对照产生了竞争性***，因此支原体条带越强，内控条带越弱

【从植物材料或植物培养细胞中提取***组DNA】

① 按下表称取适量的新鲜植物材料（如选用的是冷冻干燥植物材料，则用量减半），剪成小块放入研钵中，加入液氮，待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。

植物材料使用量 植物花、叶片10～100 mg 植物茎60～240 mg 植物根80～240 mg 植物种子80～240 mg   如选取植物的根、种子等样品时，因其***组DNA含量很低，需使用超过表格中所示的参数用量，此时请分两管进行步骤1～6的实验操作，在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤，使各管的***组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取***组DNA，请离心收集2×103～1×107的培养植物细胞，加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。

注）样品研磨应充分，否则将会严重影响***组DNA的收率。

② 将研钵移至65℃水浴，当样品粉末刚开始融化时，向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。

③ 收集650 μl研磨好的***匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注）处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时，可延长水浴时间至60分钟。

鼻咽拭子的采集

被采集人员需要 保持头部不动，采样人员去除鼻腔内壁的分泌物。然后采样人员一手轻扶被采集人员头部，一手将鼻咽拭子缓缓插入鼻腔至鼻咽部。在鼻咽部，拭子将停留数秒吸取分泌物，而后采样人员轻轻旋转取出拭子，将样本保存并送检。

咽拭子的采集

被采集人员先用 生理盐水漱口，采样人员将拭子放入无菌生理盐水中湿润。被采集人员头部微仰并保持不动，嘴张大，并发“啊”音，露出两侧咽扁桃体，采集人员将拭子越过舌根，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次。

需要注意的是，两种采集方法， 被采集人员均会稍感不适，所以在采样的过程中，被采集人员需稍稍克服一下不适感，核酸共沉剂， 配合采样人员的工作。不可过度活动头部，以免拭子划伤粘膜。如被采集人员发生刺激性咳嗽，采集过程需稍作暂停。