RNA酶A-友名生物公司

自身引导法 。合成的单链eDNA3’端能够形成一短的发夹结构，这就为第二链的合成提供了现成的引物。当链合成反应产物的DNA—RNA杂交链变性后利用大肠DNA聚合酶I Klenow片段或反转录酶合成eDNA第二链，RNA酶A，用对单链特异性的S1核酸酶消化该环，即可进一步。但自身引导合成法较难控制反应，而且用S1核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于mRNA5’端序列出现缺失和重排，因而该方法很少使用。

T4 RNA连接酶

用途：用RNA 3"末端标记；RNA和RNA分子间连接；寡核苷酸的环化；tRNA修饰；5" RACE中寡核苷酸连接到cDNA单链；在蛋白质特***点引入非天然氨基酸。

来源：由大肠杆1菌表达，表达***的来源为T4嗜菌体。

活性定义：37℃30分钟内，催化1 nmol 5"-[P]-(A)12-18成为磷酸酶不能消化的环形产物所需的酶量定义为1个活性单位。

活性检测条件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5"-[P]-(A)12-18(10μM in 5"-termini)。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷1酸酯酶。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。

DNA连接酶与DNA聚合酶用途不同

DNA连接酶主要用于***工程，将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合，故也称“***针线”。如***工程中，大肠杆1菌连接酶连接黏性末端，T4连接酶既可连接黏性末端，又可连接平末端。

DNA聚合酶在DNA copy中起做用，主要是连接DNA部分片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。