




1.在用 ALP 的 IHC 中,内源性碱性磷酸酶常使靶抗原的特异性染色分辨不清。本品***细胞制片、冰冻***切片和石蜡包埋切片中的内源性碱性磷酸酶。
2.冰冻***切片和细胞制片如外周血、骨0髓和其它体液包含大量造血干细0胞。对于冰冻***切片,建议用丙0酮固定。对于血细胞和骨0髓涂片,建议用丙0酮/甲0醇固定。
3.标本的染色依赖于染色前的***处理。不恰当的固定、冷冻、融化、洗涤、干燥、加热和切片可能产生假阳性。假阳性结果也可能由坏死和变性的细胞产生的交叉反应。
注:对于灵敏度要求不是极高的普通实验室的染胶实验,一般染色10-20分钟(可以将100ng含量以上的蛋白染出条带),低背景,无需脱色,直接观察或者拍照;
对于灵敏度要求极高的染胶实验,一般可采用染色1-2小时(可以将10ng含量蛋白染出条带),低背景,无需脱色,直接观察或者拍照;
一般染色2小时后,蛋***带基本不会再加深,而背景会继续加深,所以一般建议染色不要超过2小时。
加生物素化抗0体
1. 去掉缓冲液,擦掉切片周围的液体。
2. 加生物素化抗0体,蛋白电泳,完全覆盖切片。
3. 室温孵育 30min。
4. 用洗涤液洗去抗0体,用洗涤液润洗 5min。
加亲合素-HRP
1. 去掉缓冲液,擦掉切片周围的液体。
2. 加亲合素-HRP,完全覆盖切片。
3. 室温孵育 30min。
4. 用洗涤缓冲液洗去亲合素-HRP,用洗涤缓冲液润洗 5min。
显色
1. 加显色液(自备)显色。
可能出现的问题和解决方法
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