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蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。酶标记工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。




酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，***盒测定，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致***作用，应注意防护。有条件者应使用不致***、灵敏度高的供氢体，生化***盒，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，***盒，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。




1、 ：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 ***匀浆：将***加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。




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