非羟基化碳链长度增加的 (S)-，-二羟基酮和在型和除FI和之外的突变体中表现出低于的活性。TKgst对的活性为型的倍，这是由于Ile代替Phe，允许与的C相互作用（图）。离ThDP活性中心太远的其他残基的突变没有增强活性。较长碳链的(S)-，-羟基酮和没有获得活性或活性非常低，这可能是因为目标残基的稳定性差和与化合物-相比溶解度较低。
先前研究表明，用作供体底物的酮糖可以被酮酸羟基酸(HPA) 取代，通过释放二氧化碳使反应不可逆。因此，TK似乎是一种强大的酶，用于不对称合成α-羟基酮（方案）。当HPA作为供体时，TK对非磷酸化短碳链α-羟基醛(C–C)表现出活性。此外，TK优先接受(R)-羟基醛，产生 (S， R)α-羟基酮。发现并表征了来自嗜热脂肪地芽孢 (TKgst)的个热稳定TK，在高温下表现出高稳定性和对异常反应条件的稳健性。使用合理的诱变方法将羟基化或非羟基化醛作为受体 (，) 和脂肪族 α-酮酸作为供体，提高和扩大了 TKgst 底物特异性及其对映体偏好，确认了工程化的TKgst，其能够促进了脂肪族受体和供体底物组合的脂肪族α-羟基酮 (C-C) 的合成。
先前用α-羟基酮-测试的单位点突变体没有裂解 (±) -或 -羟基酮和的C-C 键。转向三重TKgst突变体文库（HLHXDX 或 LX，或 FX，Cyasorb3638批发在哪里，或 LX 或 LX），将先前确定的位置结合起来进行逆向反应（使用脂肪族酮酸作为供体和脂肪醛作为受体形成α-羟基酮）。在大肠BL菌株中表达文库，使用粗提物针对α-羟基酮和进行筛选，并与型TKgst进行比较。根据产物或的斑点强度，通过薄层色谱法(TLC)估计每个文库中的阳性百分比。
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