用脂肪族α-羟基酮-筛选TKgst突变体库为了确定TKgst突变体(酶裂解物或纯化酶)对脂肪族α-羟基酮-裂解的比活性,通过分光光度法在 nm 处通过消耗还原形式的烟酰胺腺呤二核苷酸 (NADH) 并使用酵母乙醇脱氢酶 (ADH) 作为辅助酶来检测醛 "–" 的释放。该方法通过移动TKgst平衡来连续测量TK的初始速度。TK作为转移酶,整个过程需要醛作为受体底物,受体的缺失会大大降低 TKgst活性。磷酸化醛糖、d-核糖--磷酸 (d-RP)、戊糖磷酸途径中的TK受体或 d-赤藓糖是 TK的非磷酸化受体之一(方案)。
随后,利用优化的反应条件考察了底物的适用范围(Scheme )。无论苯环上含有吸电子基团还是给电子基团,其立体选择性和转化率均无显著变化(a-j),其中a的构型通过单晶X-射线衍射确证;含有烯丙基的,-二酮(k-m)进行氢化时,具有较高的对映选择性(ee )和非对映选择性(dr :~:)。除烯烃外, Irganox612排名,炔基在该化学转化中也具有耐受性(n)。偏向对极性C=O键的还原表明其具有化学选择性。此外,二底物(o-p)也适用于该转化。

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