固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙l烯、聚苯乙l烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙l烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，cGMP assaykit，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
线性关系
cAMP浓度为16.0pmol/mL的样品，用0.1M HCl进行连续七次1:2梯度稀释。将实际的cAMP浓度和测定的cAMP浓度绘制图表。该直线的斜率为1.000，相关系数为0.999。
交叉反应
部分相关化合物的交叉反应由竞争ELISA测定。将可能的交叉反应物溶解到***盒分析缓冲液中，浓度从500pmol/mL至500，000pmol/mL。这些样品通过乙酰化在cAMP竞争分析中被测定，通过比较样品中交叉***的实际浓度，可以计算出交叉反应，并用百分比(%)表示。
对于生长的***培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和***裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度，为了较精l确的测定，标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸，600g离心力于室温离心，上清液直接用于实验测定分析。
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