单抗（的）制备-博特龙(在线咨询)

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

抗0体稀释液，即用于稀释抗0体的溶液。在抗原抗0体反应的实验中，需用已经制备的抗0体检测样本中的抗原，但抗0体***的浓度很高，需要稀释合适的倍数后才可以用于检测抗原。

脱脂奶粉

脱脂奶粉容易发霉变质，不利于抗0体的回收和保存；国产milk脱脂不充分会增加背景、拮抗抗原抗0体结合，且不能用来做磷酸化蛋白；不能用于稀释二抗。

通用步骤

加血0清封闭液

1. 去掉片子上多余缓冲液。

2. 取适量血0清封闭液完全覆盖切片。

3. 在湿盒中室温孵育 15min。

4. 浸入洗涤缓冲液中 5min。

加一抗

1. 去掉切片上的多余洗涤缓冲液。

2. 将稀释的一抗加到切片上，完全覆盖***细胞。

3. 在湿盒中室温孵育 30min。

4. 用洗涤缓冲液洗去一抗，单抗（的）制备，在洗液中润洗 5min。

注：如果显色速度过快，建议进一步稀释一抗，将一抗稀释度以 1/50、1/100、1/200、1/400 和 1/800，***佳稀释度的选择是显色 10min 后阳性显色效果满意而没有背景显色。

过度染色

1. 没有有效封闭内源性过氧化物酶。

2. 不完全脱蜡。

3. 过度***粘附。

4. 一抗稀释度不当。

5. 蛋白质非特异性结合。

不染色

1. 忘记加一抗、生物素化二抗或亲合素-HRP。

2. 处理过程中抗原***。

3. 固定不当。

4. 用含叠氮钠洗涤液。

5. 操作过程中样品彻0底干燥。

6. 未按操作程序操作。

染色较弱

1. 加免0疫***前没有将洗涤液去掉。

2. 抗0体稀释不当。

3. 显色前底物放置时间过长。

4. 过氧0化氢的***作用。