操作步骤
石蜡切片
1. 脱蜡:二甲0苯,室温,2 次,每次 5~10min。
2. 水合 100%、100%、95%、90%、80%、70%乙醇、蒸馏水,每级 3min。
3. 在洗涤缓冲液中润洗 10min。
4. 如有必要,封闭内源性过氧化物酶(含 0.3% H2O2 无水甲0醇)
5. 继续通用步骤。
冰冻切片
1. 空气中干燥切片,至少 1hr
2. 用前用合适的固定液固定,如果要延长保存时间,固定后在空气中干燥 1hr。 单独包装在铝箔袋中,–70°C 干燥保存,cAMP elisa ***盒,用前从冰箱取出,室温放置至少 1hr。
3. 浸入洗涤缓冲液中 10~15min。
4. 如有必要,封闭内源性过氧化物酶(含 0.3% H2O2 无水甲0醇)。
5. 继续通用步骤。
注:对于灵敏度要求不是极高的普通实验室的染胶实验,一般染色10-20分钟(可以将100ng含量以上的蛋白染出条带),低背景,无需脱色,直接观察或者拍照;
对于灵敏度要求极高的染胶实验,一般可采用染色1-2小时(可以将10ng含量蛋白染出条带),低背景,无需脱色,直接观察或者拍照;
一般染色2小时后,蛋***带基本不会再加深,而背景会继续加深,所以一般建议染色不要超过2小时。
Multi-tag多表位标签蛋白
Multi-tag多表位标签蛋白是通过大肠杆0菌表达的已知抗原表位标签的融合蛋白,用于Western Blot阳性对照。融合蛋白中含有***i-tag、Calmodulin-tag、polyglutamate-tag、E-tag、3×FLAG-tag(FLAG-tag包含在其中)、HA-tag、His-Tag、Myc-tag、S-tag、SBP-tag、Softag 1-tag、Softag 3-tag、Strep-tag、TC tag、V5-tag、T7-tag、VSV-tag、Xpress-tag、Isopep-tag、Spy-tag、Snoop-tag、Trx-tag等22种抗原标签序列。纯化后的融合蛋白可与各种蛋白标签抗0体发生特异性反应。
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