冻存细胞复苏步骤
1. 从冰箱中取出冻存的细胞,立即放入37℃水浴槽中快速解冻。
2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后,将其中的混合液移至离心管中,1000rmp,快速细胞冻存液,5分钟离心收集冻存细胞沉淀,移去上清液(操作时 小心,切勿将细胞沉淀移去)。
3. 加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓加入到细胞沉淀,轻柔地混匀,将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。
4. 镜检细胞后,可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。
原位复苏方式:
1、从冰箱取出冻存培养板,立即放入37℃水浴槽中快速解冻。
2、待冻存的细胞悬液完全融化后,轻轻吸去细胞冻存液,按照常规换液操作加入新鲜培养基继续进行培养。
细胞冷冻保存方法
冻存管冻存方式:
1、按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。
2、按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。(参考:5×105至5×106cells/ml)。
3、取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量,置于离心管中,离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min)。移去离心管中的上清液。
4、加入适量无血0清细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度为5×105至5×106 cells/ml。缓慢混合均匀,制成细胞混合液。
5、将离心管中的细胞混合液分装于已标示的冷冻保存管中建议每管1ml或1.5ml。。
6、直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱,冷冻保存。
特点描述
QuickFreezing-2×M化学组成明确,以DMEM为母液,含有DMSO,不含牛血0清或其他蛋白成分。QuickFreezing-2×M由于其独0特的细胞保护配方,在冻存过程中细胞可直接放入-70℃冰箱,无需繁琐的程序降温操作。QuickFreezing-2×M支持在-70℃冰箱中整板冻存,可在单克0隆抗0体筛选过程中方便地冻存所有初筛阳性克0隆以备用。QuickFreezing-2×M不含牛血0清或其他蛋白成分,不引入造成细胞种子污染的外源因子,如各种牛源病毒和支原体等。QuickFreezing-2×M不含牛血0清或其他蛋白成分,因而同样适用于无血0清培养的细胞冻存。QuickFreezing-2×M的包装设计为10ml×5,因而无需再次分装,而且在使用过程中不易造成不同使用者或不同细胞间的交叉污染。QuickFreezing-2×M经过SP2/0和P815等哺乳动物悬浮细胞的测试,复苏后细胞存活和生长良好。QuickFreezing-2×M建议常温运输,-20℃保存,无菌取用,有效期18个月。
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