无缝kelong（***盒）-博特龙(在线咨询)

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白，无缝kelong（***盒），分子量约70，000～72，000道尔顿^，在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成，正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿，亦见于其他多种畸形，如先天0性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等∽J。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏***有密切关系一。。因此制备高0效特异的AFP单克抗0体(McAb)具有重要的意义。

***与仪器

试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 quickantibody 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合*** 50% PEG 购自美国 Sigma 公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP) 标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠，本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 由南京大学赠送，融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他***均为国产分析分析纯。

仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材，96 孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液***( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱

材料与方法

一、材料

AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。

二、方法

1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。

第yi组：AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma，美国)腹腔***，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔***，融合前3 d作腹腔***加强免0疫。