腹0水的纯化
采集复水后,12 000 r/min 离心 15 min,去掉 沉淀等杂质。往离心后的腹0水中加入等体积的 PBS,并添加***铵固体至 50% 饱和,静置 2 h,12 000 r/min离心15 min,fu水制备,弃 上 清,用 PBS 重 新 溶 解 沉 淀,然 后 再次加入***铵固体至 45% 饱和,静置两个小时左右,12 000 r/min 离心 15 min 弃去上清,用少量 PBS 溶解沉淀,即得到较纯的抗0体,对 PBS 透析除去***铵,透析时间为24 h,透析过程中更换透析液两至三次。
QuickAntibody抗0体产生快,抗0体滴度高,抗0体亲合力高。以标准免0疫程序为例,无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备,只需要在三周内进行两针免0疫,通常在第五周即可获得ELISA滴
度(Cutoff值为0.1000)高达1:10000-1:10000000的高亲合力抗0体水平。
QuickAntibody不***抗原天然构象,从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克0隆抗0体,这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。
QuickAntibody是水溶性佐剂,使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程,抗原和佐剂只需简单混合即可免0疫动物。
QuickAntibody使用肌肉免0疫途径,与常规小鼠单克0隆抗0体制备过程中使用足垫或脾内免0疫相比,极大方便了使用。
在McAb的研制过程中,动物免0疫是McAb制备过程中的关键步骤。但是传统动物免0疫方式通常需要二个月左右,不但耗时长,而且抗原消耗的量大、对抗原纯度要求高。本实验试图通过优化传统免0疫小鼠的方法,大大缩短动物免0疫时间并减少了抗原的消耗量,为进一步组装患者肿0瘤***及血0清中AFP水平检测的***盒打下良好的基础,为临床研究、肿0瘤的诊治提供更为有效的工具。
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