细胞融合
取已免0疫小鼠的脾0脏用不完全培养基制成细胞悬液，计数。收集选择生长状态良好的 SP2 /0 骨0髓瘤细胞，制成细胞悬液，计数。将 SP2 /0 骨0髓瘤细胞与免0疫小鼠的脾细胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 选择培养基重悬混匀后滴入到铺有饲养层细胞的 3 块 96 孔细胞培养板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2 培养箱中培养。
材料与方法
一、材料
AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。
二、方法
1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。
第yi组：AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma，美国)腹腔***，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔***，pei转染***，融合前3 d作腹腔***加强免0疫。
腹0水的纯化
采集复水后，12 000 r/min 离心 15 min，去掉 沉淀等杂质。往离心后的腹0水中加入等体积的 PBS，并添加***铵固体至 50% 饱和，静置 2 h，12 000 r/min离心15 min，弃 上 清，用 PBS 重 新 溶 解 沉 淀，然 后 再次加入***铵固体至 45% 饱和，静置两个小时左右，12 000 r/min 离心 15 min 弃去上清，用少量 PBS 溶解沉淀，即得到较纯的抗0体，对 PBS 透析除去***铵，透析时间为24 h，透析过程中更换透析液两至三次。
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