细胞冻存液-苏州博特龙(图)

细胞复苏操作方法

2.1从液氮罐取出冻存细胞，立即放入37℃水浴锅或其他细胞复苏设备中，快速融化。

2.2准备离心管，加入2倍冻存细胞体积的细胞培养基，待冻存管中细胞完全融化后，将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中。

2.3 1200-1500rpm 5min离心，弃上清。

2.4加入适量新鲜培养基，使用移液管缓慢悬浮细胞，并将细胞转染细胞培养皿/瓶中，显微镜下观察细胞状态，放入细胞培养箱中培养。

2.5 24h后观察细胞状态，并更换新鲜细胞培养液。

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使用方法

1. 用37℃水浴解冻细胞冻存液，并上下振荡数次混匀。

备注：为了尽量减少污染，未使用完的细胞冻存液***好冻回-20℃，反复冻融不影响使用效果。有沉淀

属于正常情况，主要为DMEM高糖培养基中的脂类与盐类的析出。

2. 用细胞消化液将生长良好的细胞消化成单细胞，细胞冻存液，并用细胞计数器或血球计数板计数细胞浓度。

备注：悬浮细胞不需要消化但仍需要细胞计数，不易消化成单细胞的各种293细胞等***好使用含有EDTA

的胰酶进行消化。

3. 用低速离心沉淀细胞，弃去上清。

备注：通常2000~3000rpm离心5~10min即可。

4. 用适量细胞冻存液重悬细胞。

备注：细胞浓度可根据情况调整为1~5×106/ml，通常为3×106/ml左右。

存储条件

储存于4℃以下，质量保障期从产品的生产日期起，为期两年。3个月以上没有使用冻存液计划时，尽可能-20℃冷冻保存。为避免重复冻融过程可能导致的冻存液品质下降和性能降低，推荐将产品分装成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱冻存。

冻存细胞复苏步骤：

1、 从冰箱中取出冻存的细胞，立即置于37℃水浴槽中快速解冻。

2、 待冻存管中的细胞混合液完全融化后，立即加入1ml细胞培养基于冻存管中与细胞混合，将其中的混合液移至含有约5ml该细胞培养基的离心管中，1000rmp离心5分钟，收集冻存细胞沉淀，移去上清液（注意勿将细胞沉淀倒掉）。

3、 加入适量的新鲜培养基，使用移液管缓缓加入细胞沉淀中，轻柔混匀，将混匀好的细胞移至事先准备好的培养容器中。

4、 镜检观察，待细胞状态***后可进行其他研究或者培养处理。