cAMP作为的第二信使，可调节细胞对各种外源和内源信号分子的反应。 它主要通过激l活蛋白激酶、控制特定的离子通道、磷酸二酯酶调节细胞环核苷酸浓度以及激l活Epac(通过cAMP直接激l活蛋白交换)(3-6)来调节生理过程。通过腺苷酸环化酶可以实现ATP转化为cAMP。 哺乳动物体内的主要腺苷酸环化酶家族均是横跨膜的，具有9个亚型，且可通过G蛋白Gs或钙离子/钙调素(1)激l活。另外，还有一种可溶性的腺苷酸环化酶，可以通过碳酸盐或Ca2 +调节(7)。 
***盒组成材料和***
1. 羊抗小鼠IgG包被的96孔微孔板一张 catalog No.30101
该微孔板将特异性识别小鼠IgG 的山羊抗l体包被于可拆分酶标条上。
2. cAMP偶联的辣根过氧化物酶工作液6 mL catalog No. 30102
本包装含1000×偶联酶储存液和稀释缓冲液。
3. 抗cAMP的小鼠单克l隆抗l体工作液6 mL catalog No. 26002-2
本包装含1000×抗l体储存液和稀释缓冲液。
注意：为了稳定和长效的实验，抗l体储存于-80℃。在使用前将6μL 1000×偶联酶储存液加入到6 mL 稀释缓冲液中配制为工作液，并轻轻混匀。工作液请避免反复冻融。
4. 中和液6 mL catalog No. 30103
5. 10×浓缩洗涤液15 mL catalog No. 30103
含去污剂的磷酸盐缓冲液。
6. cAMP标准品0.25 mL catalog No. 30203
浓度5000 pmol/ mL
7. 显色底物A，12 mL catalog No. 30107
8. 显色底物B， 12 mL。 catalog No. 30108
9. 终止液，6 mL； catalog No. 30110
注意：该溶液有腐蚀性；储存时请旋紧瓶盖
武汉纽斯特生物科技有限公司（d），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，cAMP kit，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往。
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Ras被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Ras被激l活。
1.
准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2.
每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3.
一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。
4.
将离心管置于30°C条件下反应30 min并不断搅动。
5.
终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
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