ELISA***盒-ELISA检测原理介绍
酶联吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)指将可溶性的抗原或结合到聚乙烯等固相载体上,利用抗原结合专一性进行反应的定性和定量检测方法。它是应用比较多的一种酶技术。ELISA***盒(ELISAKits)已成为***和植物病理学研究中的常用诊断工具,是检测***提取液和细胞培养液中目标/抗原的理想工具,也是重要的质量控制手段。
ELISA***盒主要实验原理
·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相载体表面,原因是蛋白质和聚乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反应等活性;
·标记:抗原或者可通过共价键与酶连接成酶结合物,呕吐***ELISA***盒供应商,而此种酶结合物仍能保持其活性和酶的催化特点;
·显色:酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者结合后,也被固定在固相载体上,加入酶的底物之后可出现显色反应,根据反应的颜色深浅可计算抗原或者的相对含量。
Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案
背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
1 洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。
2 底物污染,呕吐***ELISA***盒,未避光保存,出现颜色 弃去底物,呕吐***ELISA***盒哪家好,重新配置
3 样品稀释液污染 弃去稀释液,重新配置
4 吸头重复使用,未洗净或消毒不 吸头尽可能一次性使用
5 不正确的孵育时间,呕吐***ELISA***盒价格,温度(尤其是底物孵育的时间) 常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。完全按照说明书要求。
6 偶联***(strept***idin-HRP)浓度过高 按照说明书调整到合适的浓度
7 ELISA板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板
8 没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间
9 样本溶血严重 建议使用非溶血或轻微溶血样本,严重溶血样本会导致背景偏高。
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