1、***取材:***取材应尽可能新鲜。由于***RNA降解较快,所以新鲜***和培养细胞在30 min 内固定。
2、细胞***固定目的与注意事项:
(1)保持细胞结构;
(2)大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平;
(3)使探针易于进入细胞或***。
常用的固定剂是多聚甲醛,与其它醛类固定剂不同,多聚甲醛不会与蛋白质产生广泛的交叉连接,因而不会影响探针穿透入细胞或***。
原理
原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与***细胞内待测的核酸复性结合而使得***细胞中的特异性核酸得到***,并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。
经特定标记的核苷酸链为探针,可与***切片、细胞或染色体标本中的待检DNA片段或mRNA进行杂交,tunel检测服务,然后显示标记物,从而分析待检核酸的分布和含量。利用此项技术可研究各种***在染色体上的***,编码某种蛋白质的mRNA在胞质中的表达。
PCR技术是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异DNA或DNA片段的方法。其原理是设计特异引物,在TaqDNA聚合酶催化作用下,经过高温变性、低温退火和适温延伸3个步骤反复循环,对某一特定模板的特定区域进行扩增,反应结束后应用凝胶电泳或测序等方法分析产物。因此,该技术可以直接检测******、细胞中是否存在某种病毒DNA,同时PCR技术还是***突变检测的前期必备技术。
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