微阵列芯片应用流程
1)制备靶点
从生物标本中提取核苷酸并进行标记;
(2)杂交
让靶点与芯片上的cDNA或寡核苷酸序列进行孵育;
(3)获取数据
扫描与探针杂交的靶点表现出来的信号强度
(4)数据分析
从大量数据中得出具有生物学意义的结论
微阵列芯片技术通过测定能够与探针杂交的mRNA的数量,反映表达此mRNA的***的转录情况,微阵列基片的价格,芯片的构建首先要根据研究的需要选择***及相应的探针,其次是从标本中提取mRNA,并制备出靶点,然后将靶点加入芯片,进行孵育杂交、冲洗掉没有杂交的样品以及扫描等操作,广东微阵列基片,得到原始数据,再将这些数据进行标准化和统计分析后得到结论,构造适当的微阵列芯片是开展后续研究的基础。
2.APES(3-氨丙基-乙氧基)
APES必须现用现配。用此方法黏合的玻片应垂直烤片而不能水平烤片,微阵列基片厂家,否则,***片中易出现气泡。 APES的使用方法:用50倍稀释(APESl份、49份混合),将洗净的玻片放人稀释好的APES中,停留20~30秒,取出稍停,再人纯或蒸馏水中涮去未结合的APES。置通风橱中晾干即可。注意用APES防脱片处理的载玻片捞片时***应一步到位.并尽量减少气泡存在,以免影响染色结果。注意不要将APES与其他防脱混合使用。
使用广泛的氨基和羧基偶联剂就要数EDC和NHS(Sulfo-NHS)了。大多数情况下,微阵列基片是什么,同时使用EDC/NHS的交联于只使用EDC的,NHS的使用能够极大增强偶联效率。但也有个例,比如2012年的一篇工作(Diagnostics (Basel). 2012 Aug 27;2(3):23-33.),他们在APETS修饰的金芯片和96孔板表面组装一抗,发现单独使用EDC比同时使用EDC/NHS和EDC/Sulfo-NHS都。
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