青海细胞-英瀚斯-细胞实验

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，青海细胞，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、

病毒和***等。单丹磺酰尸胺(Dansylcad***erine，MDC是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，流式细胞检测，通常被于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm ，阻断滤光片波长512nm。Leagene MDC染色液适用于培养细胞的自噬染色，可与EB合用双染。

大鼠主动脉内皮细胞的分离培养

方法：分离大鼠主动脉，直接贴壁于培养皿中，荧光倒置显微镜观察细胞形态，免yi组化Ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时***块边缘有游离的 新生细胞长出，7天即融合成片.消化传代后细胞呈短梭形或三角形，单层生长，铺路石状，Ⅷ因子表达阳性，细胞生物学，呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法，冻存细胞存活率高，为体外研究提供了稳定的模型.

细胞冻存有哪些注意事项？

细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是的。

细胞冻存的步骤：

配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛的冻存培养液;

取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用 PBS 清洗。

去除 PBS，加入适量胰蛋白酶 (覆盖培养皿表面) 把单层生长的细胞消化下来;

离心 1000rpm，5min;

去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的终密度为 5×106/ml~1×107/ml;

将细胞分装入冻存管中，每管 1~1.5 ml;

在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;

冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时，细胞实验，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。