小鼠精原gan细胞分离富集和培养
成年小鼠gao丸中约有108个细胞,细胞实验外包,其中约有 2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02~0.03%,精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清终止消化,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(CD90.2)阳性CD117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前CD117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%,CD90.2阳性细胞占28.98±4.51%, 二者都阳性细胞占8.98±2.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 CD117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%,CD90.2阳性细胞占56.98±4.51%,二者都阳性细胞占 8.20±3.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无显著性(P>0.1),细胞实验,CD90.2阳性细胞和CD117阴性和CD90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有显著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作为标志分子,细胞实验外包费用,percoll离心后细胞悬液经FACS分选后获得细胞纯度
选择实验外包公司需要注意哪些事项?
1. 实地考察
可以到公司实地考察一下实验室,看一下实验室环境、设备仪器情况,是否能满足实验方案所需条件。能整体承接课题,动物细胞。一些大型仪器公司不一定有,看有没有高校平台资源渠道共享。确保是真实进行实验的,这样后续实验结果数据也比较可靠。
2. 方案评估
实验合作前期一般会进行所需实验内容的评估,来确定终实际实验方案和报价。方案评估可以看出外包团队的性。一个可靠的外包公司会对方案提出针对性的建议,评估各项实验是否能做,以及根据预算情况和实际操作对细节适当地调整。任何实验都是有不确定性的,细胞实验外包选哪家,但是前期敲定好方案能为后续实际开展实验打下良好基础,也会省去许多隐患和麻烦。
透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边.集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
结果评判:调亡细胞体积变小,细胞质浓缩。调亡I期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象( c***itati)的空泡结构; IIa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生调亡小体。
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