使用广泛的氨基和羧基偶联剂就要数EDC和NHS(Sulfo-NHS)了。大多数情况下,同时使用EDC/NHS的交联于只使用EDC的,替代肖特玻片公司,NHS的使用能够极大增强偶联效率。但也有个例,比如2012年的一篇工作(Diagnostics (Basel). 2012 Aug 27;2(3):23-33.),他们在APETS修饰的金芯片和96孔板表面组装一抗,发现单独使用EDC比同时使用EDC/NHS和EDC/Sulfo-NHS都。
物理吸附是简单的***固定化方法,包括静电作用、疏水作用、极性相互作用等非共价键作用。优点显而易见—省时省力省钱,缺点也是不可避免—(1)***偶联的取向(orientation)不可控,什么是替代肖特玻片,完全由概率来确定;(2)物理吸附作用力弱,上海替代肖特玻片,应用时有***脱离现象。学中,经常用到物理吸附的地方就是一抗的负载过程。比如在ELISA板(聚)和侧流试纸条(纤维素膜)等表面负载***的时候,用到的就是物理吸附作用。
尽管如此,通常原位合成方法仍然比较复杂,除了在***芯片研究方面享有盛誉的 Affymetrix 等公司使用该技术合成探针外,其它中小型公司大多使用合成点样法。后一方法在多聚物的设计方面与前者相似,合成工作用传统的 DNA 或多肽固相合成仪以完成,只是合成后用特殊的自动化微量点样装置将其以比较高的密度涂布于纤维膜、尼龙膜或玻片上。支持物应事***行特定处理,例如包被以带正电荷的多聚赖酸或氨基***。现在已有比较成型的点样装置出售,如美国 Biodot 公司的点膜产品以及 Cartesian Technologies 公司的 PixSys NQ/PA 系列产品。前者产生的点阵密度可以达到 400/cm2 ,后者则可达到 2500/cm2 。
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