以合成寡核苷酸探针为例,该技术主要步骤为:首先使支持物羟基化,并用光敏保护基团将其保护起来。每次选取择适当的蔽光膜( mask )使需要聚合的部位透光,其它部们不透光。这样,光通过蔽光膜照射到支持物上,替代肖特玻片厂家,受光部位的羟基解保护。因为合成所用的单体分子一端按传统固相合成方法活化,另一端受光敏保护基的保护,所以发生偶联的部位反应后仍旧带有光敏保护基团。因此,每次通过控制蔽光膜的图案(透光与不透光)决定哪些区域应被活化,以及所用单体的种类和反应次序就可以实现在待***点合成大量预定序列寡聚体的目的。
***芯片又称为DNA微阵列(DNA microarray),为什么替代肖特玻片,可分为三种主要类型:1)固定在聚合物基片(尼龙膜,替代肖特玻片产品,纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段,通常用同位素标记的靶***与其杂交,通过显影技术进行检测。这种方法的优点是所需检测设备与目前分子生物学所用的显影技术相一致,相对比较成熟。但芯片上探针密度不高,样品和***的需求量大,定量检测存在较多问题。
2.大规模***心片
大规模***芯片通常涉及***组规模与数量(一般大于10000个***),分别采用接触式点样、非接触式点样或者半导体技术制备样品。接触式点样方法包括点样元件或点样元件中的液体和芯片基片间有直接接触的各种方法。非接触式芯片制备方法包括各种芯片制备中不需点样元件和芯片基片间直接接触的各种技术,北京替代肖特玻片,其样头的是以可控的方式从喷嘴中喷出小体积的液滴。半导体制备技术指借鉴计算机芯片制造业中的微型化加工方法的***芯片制备技术。***芯片的工作流程如下:
(1) 经大规模PCR扩增获得***cDNVA插入片段。
(2)用机械手将 PCR产物点在玻璃板上,变性、固定。
(3)分 别从不同或***中分离mRNA.反转录生成cDNA.
(4)用 不同的荧光染料标记不同或***的cDNA。
(5)将标记好的 cDNA与点好的芯片进行杂交。
(6)激光扫描芯片杂交结果, 计算机处理。
(7)分 析杂交数据。
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