实际操作时需要注意的是,虽然共价偶联的方法优于物理吸附,但基于氨基和羧基的***固定方法仍具有一定程度的随机性,有时在Fab区(用于结合抗原)存在易于修饰的氨基/羧基,在与固体表面偶联后会造成***的失活。在***领域,***与的偶联同样存在上面所说的问题(由于***表面可能存在很多可修饰的氨基酸,表面醛基修饰处理,不能确定连在哪个部位
微阵列芯片应用流程
1)制备靶点
从生物标本中提取核苷酸并进行标记;
(2)杂交
让靶点与芯片上的cDNA或寡核苷酸序列进行孵育;
(3)获取数据
扫描与探针杂交的靶点表现出来的信号强度
(4)数据分析
从大量数据中得出具有生物学意义的结论
微阵列芯片技术通过测定能够与探针杂交的mRNA的数量,反映表达此mRNA的***的转录情况,芯片的构建首先要根据研究的需要选择***及相应的探针,表面醛基修饰方法,其次是从标本中提取mRNA,台湾表面醛基修饰,并制备出靶点,然后将靶点加入芯片,进行孵育杂交、冲洗掉没有杂交的样品以及扫描等操作,表面醛基修饰厂家,得到原始数据,再将这些数据进行标准化和统计分析后得到结论,构造适当的微阵列芯片是开展后续研究的基础。
2.生物学意义分析
主要指通过分析芯片杂交数据,研究差异表达***的生物学意义。通常,在芯片中某一或发育时期可能有成千上万个差异表达***。例如,***芯片分析植物根部可能有400多个特意表达的***,如果要将这些***的来龙去脉都搞清楚,可能要追溯超过4000篇以上的文献(假设1个***需要查阅10篇文献)。这种不捡***的方法耗时耗力,所获得的结果也往往没有意义。
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