水稻种子是人类重要的食物来源,其发育涉及一个复杂的调控网络,其中转录因子发挥了关键作用。MADS转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子,已有的研究表明,几乎所有的水稻MADS***都在种子中表达,但对MADS家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。
在这项研究中,研究组基于前期的表达谱研究基础,分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子MADS29。细致分析表明,MADS29在花药、胚珠和种子中均表达,且在受精后的母体***表达量高。MADS29的反义转1***植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全***组表达谱芯片分析等,研究人员证明了MADS29通过调控程序化死1亡(PCD)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示,MADS29能够通过直接结合程序化死1亡相关***的启动子区域而调控其表达,进而影响胚乳发育。
原理
根据抗原反应和化学显色原理,***切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,后通过呈色反应或荧光来显示细胞或***中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原反应产物,从而能够在细胞爬片或***切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。
后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),植物染色体压片技术服务,含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
原位杂交的预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×***洗涤5分钟×2次;37℃0.5×***洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×***洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×***洗涤15分钟×1-2次)。
植物染色体压片技术服务-科锐诺(在线咨询)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司坚持“以人为本”的企业理念,拥有一支高素质的员工***,力求提供更好的产品和服务回馈社会,并欢迎广大新老客户光临惠顾,真诚合作、共创美好未来。科锐诺——您可信赖的朋友,公司地址:湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼,联系人:王经理。