在开始离心您的样品之前,先要考虑温度。如果您在使用一个冷冻离心机,那么在开始前需要让仪器内部的温度达到您的理想值,或者用别的方法来给转头降温。
离心即将开始前,需确定您所有的管盖都盖紧不会松开了。
在将离心管放入转头时,要保证每个样品和另一个相对位置的样品重量一致。
如果您只有一个离心管,那就要找到另一个等重的离心管来保证平衡。
如果您有三个同样重量的离心管,离心管型号,可以将它们摆成一个三角位置以保证相互平衡。
离心技术是利用物体高速旋转时产生强大的离心力,实验室离心管,使置于旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮,从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。这里的悬浮颗粒往往是指制成悬浮状态的细胞、细胞器、病毒和生物大分子等。离心机转子高速旋转时,当悬浮颗粒密度大于周围介质密度时,颗粒离开轴心方向移动,发生沉降;如果颗粒密度低于周围介质的密度时,则颗粒朝向轴心方向移动而发生漂浮。常用的离心机有多种类型,一般低速离心机的转速不超过6000rpm,高速离心机在25000rpm以下,离心机的速度达30000rpm以上。
预制梯度等密度离心法。要求在离心前预先配制管底浓而管顶稀的密度梯度介质,常用介质有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等,待分离样品一般铺在梯度液顶上,如需挟在梯度液中间或管底部,则需调节样品液密度。离心后,不同密度的样品颗粒到达与自身密度相等的梯度层,丹东离心管,即达到等密度的位置而获得分离。
自成梯度等密度离心法。某些密度介质经过离心后会自成梯度,例Percoll,可迅速形成梯度,CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺经长时间离心后也可产生稳定的梯度。需要离心分离的样品可和梯度介质先均匀混合,离心开始后,梯度介质由于离心力的作用逐渐形成管底浓而管顶稀的密度梯度,15ml离心管,与此同时,可以带动原来混合的样品颗粒也发生重新分布,到达与其自身密度相等的梯度层里,即达到等密度的位置而获得分离。
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