13.合成的引物5"端是否有磷酸化
答：合成的引物5"为羟基，没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5′端磷酸化，或者要求引物合成公司合成时直接在5′或3′端进行磷酸化，需要另外收费。
14.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？
连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要改善引物退火的条件。SiRNA分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。
蛋白质定量组学服务
细胞内蛋白质组丰度的动态变化对不同生命过程有重要影响。例如在许多***的发生和发展进程中，dna检测，常常伴随着某些蛋白质的表达异常。目前定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)策略和非标记的(label free)定量策略，其中标记策略又分为体内标记(如 SILAC、15N 标记)，以及体外标记(如 iTRAQ、TMT 标记) 。
传统的基于2D双向凝胶电泳分离的蛋白质组通常可以鉴定出约1000种蛋白，对全蛋白质组的覆盖仅在5~10%左右，***检测怎么做，不能满足高通量定量蛋白质表达谱分析的要求。我们结合样品制备与高分辨率、高灵敏度的液相色谱-质谱联用技术，可在细胞与***类样品中鉴定直至多于10000个蛋白，对全蛋白质组的覆盖>60%。结合生物信息学分析，为您构建高通量蛋白质定量表达谱。
DNA测序检测
1. PCR测序反应
(1)取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加***:
所加***测定模板管标准对照管
BigDye Mix
1μl
1μl
待测的质粒DNA
1μ 1
pGEM-3Zf (+)双链DNA
-1μ1
待测DNA的正向引物
1μ 1
M13(-21)引物- 1μ 1
灭菌去离子水
2μ 1
2μ 1
总反应体积5μ 1，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧PCR管，用手指弹管混匀，稍离心。
(2)将PCR管置于9600或2400型PCR仪.上进行扩增。98C变性2min后进行PCR循环，咸阳pcr，
PCR循环参数为96C 10s， 50C 5s， 60°***min， 25 个循环，扩增结束后设置4C保温。
2.乙醇法纯化PCR产物
(1) 将混合物离心，将扩增产物转移到1.5ml EP管中。
(2)加入25μ 1/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于
4C离心30 min，小心弃上清。
(3)加70%(V/V)的乙醇50μ 1 洗涤沉淀2次。12 000r/min 于4C离心5min，小心弃上清和
管壁的液珠，真空干燥沉淀10~ 15min。
3.电泳前测序PCR产物的处理。
(1)加入12μ 1的TSR于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解DNA沉淀，稍离心。
(2)将溶液转移至盖体分离的0.2ml PCR管中，稍离心。
(3)在PCR仪上进行热变性(95C 2min)，实时荧光定量pcr，冰中骤冷，待_上机。
4..上机操作按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立
运行的测序顺序文件。
5.仪器将自动进行序列分析，并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知，可通过
序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。
6.测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与***。
实时荧光定量pcr-咸阳pcr-英瀚斯(查看)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司位于江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学***大学科技园科创楼A301。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前英瀚斯在技术合作中享有良好的声誉。英瀚斯取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。英瀚斯全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。
