石蜡切片制作流程1.取材:取材必须新鲜,切取材料时刀要锐利避免挤压***,一般厚度不超过2mm,大小不超过5×5mm2,取后立即投入固定液。
2.固定:固定剂为***块体积的10~15倍,一般为4%的中性多聚甲醛,固定时长24小时。
3.脱水:70%酒精→85%酒精→90%酒精→95%酒精→无水乙醇Ⅰ→无水乙醇Ⅱ(不同***脱水时间不同)
4.透明:透明剂能同时与脱水剂和石蜡混合,它取代了脱水剂后,石蜡便能顺利地渗入***
石蜡包埋切片实验基本步骤主要有以下几步:
1、取材:新鲜***固定于4%多聚甲醛24h以上。将***从固定液取出在通风橱内用***刀将目的部位***修平整,将修切好的***和对应的标签放于脱水盒内。
2、脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-I5-10min-II5-10min-蜡I1h-蜡II1h-蜡III 1h。
3、包埋:将浸好蜡的***于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将***从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4、切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水上将***展平,用载玻片将***捞起,病理切片技术服务,并放进60℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
切片经HE染色后,要脱水透明,才能用中性树胶封盖。he染色对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS 洗涤3次。着况与***或细胞的种类有关。切片在苏mu素染液中停留过长;或切片太厚;或分化时间太短。这种情况首先镜下看看切片厚度(佳厚度1-2层细胞核),要么重新染色,要么重新制片。染色的终结果是:细胞核呈蓝色、胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一样的红色,病理技术服务提醒:在进行HE染色需要染色时间,脱水,染色时间不一样,需要等 ,明确HE评判标准。
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