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流动相制备：      预混：流动相预混合是通过分别测量每种溶剂的体积并将它们合并到溶剂容器中来完成的。当与水混合时，流动相过滤配件代理商，会出现负混合体积。例如，准备1升的/水 (50:50)，在量筒中分别量取 500 毫升的和水，然后将它们混合在一起。由于溶剂在混合时会收缩，因此不宜将500毫升倒入1升容量瓶中并用水定容，因为需要超过 500 毫升的水。

     缓冲：含有酸性或碱性分析物的样品需要在流动相中加入缓冲液。pH 调节应单独在水性缓冲液中进行，即在将其与任何混合之前进行。应采取预防措施以防止缓冲沉淀的任何可能性。可与大多数缓冲液混溶。当磷酸盐缓冲液与 混合时，上限应为60-80% ACN，磷酸盐缓冲液的浓度应小于 15mM 以防止沉淀。2.5至3的酸性pH值是大多数制药应用的良好起点。这是由于大多数酸性分析物的电离受到***以及碱性分析物与硅胶基色谱柱上表面硅醇的相互作用。用于流动相制备的常见酸有磷酸、甲酸和。在整个梯度运行过程中，缓冲添加剂的浓度必须保持恒定。通常建议在流动相的水相和有机相中使用相同浓度的 TFA 或其他酸（吸收紫外线）以***梯度运行期间任何类型的基线偏移。

      另外，选择合适的流动相吸滤头（又称溶剂进样口过滤器)可有效滤除流动相中的固体颗粒杂质，但未经过滤的溶剂或溶剂瓶中生长的微生物都会降低溶剂入口过滤头的寿命和泵的性能，因此，需要定期清洗或更换溶剂进样口过滤器。

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装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，梅州流动相过滤配件，然后再加压用淋洗剂 “走柱子”，本法大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂“走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较方便，但大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如，更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，流动相过滤配件实验耗材，但是，流动相过滤配件***代理，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。解决的办法是：、硅胶一定要填结实；第二、一定要用较多的溶剂“走柱子”，一定要到柱子的下端不再发烫，***到室温后再撤去压力。也有介绍在硅胶的上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。但是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。

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上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，再加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂（好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量溶剂洗涤后，再加入。湿法较方便，熟手一般采用此法。 上样完毕后，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍，但又不能稀释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好。

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