武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位。例如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。GFP是绿色荧光蛋白，在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光，从而可以地定位蛋白质的位置。
大豆[Glycine max(L.)Merrill]是我国主要的粮食作物和油料作物,但土壤盐渍化成为影响大豆生长和产量的主要限制因素之一。近年来,基因工程技术被广泛应用于提高植物的耐盐性,将抗逆基因导入优良大豆品种,培育抗逆高产新品系,为解决这一问题提供了新途径。目前已有多个耐盐相关基因应用于植物抗逆研究,其中Na /H 逆向转运蛋白基因家族研究较为深入,其主要作用是通过将细胞质内的Na 外排到胞外或者将Na 区隔化到液泡中,来维持细胞内的Na 稳态和Na /K 比相对稳定,从而减少盐胁迫对植株造成的伤害。但有关大豆Na /H 逆向转运蛋白基因的生物学功能分析以及应用的研究还很少。本研究以超表达Gm NHX1基因的拟南芥及酵母nhx1缺失突变体为材料,通过非损伤微测技术、real-time PCR以及酵母互补试验,验证Gm NHX1基因的耐盐功能;借助基因枪法转化洋葱,观察Gm NHX1蛋白的亚细胞定位。在此基础上,利用根癌农介导的大豆子叶节转化法进行Gm NHX1基因的遗传转化。
谷氨酰胺合成酶(GS; EC 6.3.1.2)是植物N素同化途径中最为关键的催化酶之一,被称为是植物中无机态N转化为有机态N的“门户”,对植物N素吸收、同化和利用效率(Nitrogen use efficiency)有着极为重要的影响。高等植物中的GS同工酶主要分为两类:胞质型GS1主要同化从土壤吸收的初级氨及再同化从植物体内各个N循环途径所释放的氨;质体型GS2同化由NO3--N还原而来及光呼吸过程所释放的氨。N素供应对甜瓜的生长发育、果实的产量和品质形成有非常重要的影响,目前甜瓜N素代谢研究还停留在N营养生理与果实品质及产量层面,在分子机理水平的研究报道很少,尤其是对与N素同化和利用效率紧密相关的GS酶基因的研究还是空白。因此,本文以甜瓜作为对象,在从甜瓜中出胞质型GS基因M-GS1的基础上,对M-GS1及课题组到的甜瓜质体型GS基因M-GS2的基因组拷贝数、表达产物的亚细胞定位及生化特性、在甜瓜中的表达调控特征等进行了研究和对比分析,从基因、蛋白质和细胞水平对甜瓜GS基因进行了系统的功能验证和鉴定,开展了甜瓜N营养代谢的分子生理研究;进而在植株水平研究M-GS1在转基因超量表达后提高植株N素同化效率的潜能,为甜瓜GS基因的应用、利用GS基因改良植物N素利用效率的研究提供新的材料和依据。