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核酸电泳凝胶的染色

凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色，常用***化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。

银染法的灵敏度较高，可如下操作:

(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇，0.5%冰醋酸)中固定10分钟;

(2) 双蒸水洗1-2次;

(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中，室温反应15-30分钟;

(4) 充分水洗;

(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH，转印电泳槽厂家，含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰，本底适宜;

(6) 用5%冰醋酸终止反应。

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为啥用琼脂糖呢，因为他有很多优点奥！

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琼脂糖的凝胶性是由存在的氢键所致，凡是能***氢键的因素都能导致凝胶性的***。琼脂糖具有亲水性，并几乎完全不存在带电基团，对敏感的生物大分子很少引起变性和吸附，是理想的惰性载体。天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80%）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含***根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之***根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。这也就是琼脂糖比琼脂贵那么多的原因了。

琼脂糖水平电泳槽实验操作

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1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。

注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。

2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉。

注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。

3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖

注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，转印电泳槽，停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。

注意：EB是一种致***物质。使用含有EB的溶液时，请戴用手套。EB在可见光下会分解。

5.将琼脂糖溶液倒入制胶托盘中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5－8 mm 之间。

注意：不要产生气泡，溶液温度太高(gt;60℃)，会使得水分

过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。

6.在室温下使胶凝固（大约30 分钟），然后放置于电泳槽中进行电泳。

注意：凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。