




蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法
1:“微笑”(两边翘起中间凹下)形带,主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所
致,多出现于较厚的凝胶中。 处理办法:待其充分凝固再作后续实验。
2: “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带
主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法:在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡。
3:出现拖尾现象?
主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。
处理办法:加样前离心;选择适当的样品缓冲液;电泳缓冲液时间过长,重新配制
4:电泳的条带很粗?
电泳中条带很粗是常见的事,主要是未浓缩的原因。
处理办法:适当增加浓缩胶的长度; 保证浓缩 胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压
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蛋白电泳
蛋白电泳的分子筛效应和电荷效应
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分子筛效应:
大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时,受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率 ,这就是分子筛效应。
电荷效应:
蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的高浓度蛋白质区,但由于每种蛋白质分子所带有效电荷不同,因而泳动率也不同,因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个区带。在进入分离胶时,SDS PAGE电泳槽厂商,电荷效应仍起作用。目前,PAGE连续体系应用也很广,虽然电泳过程中无浓缩效应,SDS PAGE电泳槽,但利用分子筛及电荷效应也可使样品得到较好的分离,加之在温和的pH条件下,不致使蛋白质、酶、核酸等活性物质变性失活,也显示了它的优越性。
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制胶
将玻璃板洗净晾干,将厚板粘有边条的一侧与薄板重叠(薄板向外),放入制胶框内(如果放置困难可选择先放厚板再放薄板要求2块玻璃板底面对齐),将制胶夹胶框的卡锁转向外侧,将玻璃板固定。
用手捏紧制胶架上的固定夹,SDS PAGE电泳槽多少钱,将整个制胶框置于制胶架上,松开固定夹,令卡块压住厚玻璃板,使玻璃板底面贴紧制胶架底部的密封垫。
向凝胶腔内缓慢注入配制好的聚丙烯酰胺凝胶(如灌制梯度凝胶需使用梯度混合器),SDS PAGE电泳槽供应商,先灌注分离胶,待分离胶凝固后,再灌浓缩胶。 浓缩胶灌满后,插入样品梳,待30至45分钟凝胶完全聚合后,制胶完成。
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