核酸电泳
核酸电泳凝胶的制备和电泳步骤
操作方法如下:
(1) 根据所需要的凝胶的大小将相应的凝胶托盘按正确位置放置在制胶器内;
(2) 称取适量琼脂糖,置电泳缓冲液中,加热使琼脂糖溶解;
(3) 待溶液冷至60℃,加入10mg/ml EB贮存液,使终浓度达0.5mg/ml;
(4) 在距离胶模底板0.5-1mm处放置电泳梳,将琼脂糖溶液倒入胶模中,厚度约3-5mm,注意避免产生气泡;
(5) 凝胶完全凝固后,移去梳子和透明胶,将凝胶放入电泳槽。加入TBE缓冲液使恰好没过胶面约1mm;
(6) 将DNA样品与1/6体积加样缓冲液混合后,加入样品槽中;
(7) 接通电源,使样品槽在负极端,用1-5v/cm的电压,电泳适当时间;
(8) 电泳结束后,可将含EB的凝胶直接放在紫外线检测仪上观察,并拍照记录,也可将不含EB的凝胶在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分钟,再如上观察和拍照,记录结果。
蛋白电泳
蛋白电泳
我们通常把“蛋白电泳”俗称为跑胶,如果按照这个字面意思来理解的话就是把蛋白质放在胶上跑,为啥要让蛋白质在胶上跑呢?我们提到的蛋白是总蛋白,也就是说细胞里所有(理论上)蛋白都在里头了,但是我们要检测的只是其中的一两种,所以我们得想办法把各种蛋白质分离开,借助的方法就是跑胶。与核酸电泳一样,蛋白质电泳也需要marker和loading buffer。与核酸电泳不一样的是,蛋白电泳(做WB时)的marker本身就是带有颜色的,在电泳过程中,我们可以清楚地看到marker上的每一个条带的位置,而核酸电泳的过程中我们是看不到marker的每一条带的,只有把胶经过核酸染料染色后,并且在紫外光下我们才能看到marker的条带。蛋白电泳的分子筛效应和电荷效应北京龙方科技***生产、销售电泳槽,以下信息由龙方科技为您提供。
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蛋白电泳制胶
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制胶
将玻璃板洗净晾干,将厚板粘有边条的一侧与薄板重叠(薄板向外),放入制胶框内(如果放置困难可选择先放厚板再放薄板要求2块玻璃板底面对齐),将制胶夹胶框的卡锁转向外侧,将玻璃板固定。
用手捏紧制胶架上的固定夹,将整个制胶框置于制胶架上,松开固定夹,令卡块压住厚玻璃板,使玻璃板底面贴紧制胶架底部的密封垫。
向凝胶腔内缓慢注入配制好的聚丙烯酰胺凝胶(如灌制梯度凝胶需使用梯度混合器),先灌注分离胶,待分离胶凝固后,再灌浓缩胶。 浓缩胶灌满后,插入样品梳,待30至45分钟凝胶完全聚合后,制胶完成。