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17.脱水Ⅱ
将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色,然后放入无水乙醇中3-5min。后用吸水纸吸干多余的乙醇。
18.透明
切片放入二甲本Ⅰ、Ⅱ中各5min。
二甲本应尽量保持无水,应经常更换,或用纱布包无水硫1酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲本中出现白雾现象,说明脱水未尽,应退回乙醇中重新脱水,否则切片难以镜检。
19.封藏:中性树胶封存
因切片经二甲本透明,使用中性树胶作为封藏剂,树胶可用二甲本稀释至合适的稠度。
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⑦切成的蜡带到20-750px长时,右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起,以免卷曲,并牵引成带,平放在蜡带盒上,靠刀面的一面较光滑,朝下,较皱的一面朝上。
⑧用单面刀片切取蜡片一小段,放在载玻上加水一滴,置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。
⑨切片工作结束后,应将切片刀取下用氯1仿擦去刀上沾着的石蜡,把切片机擦拭干净妥为保存。
9. 展片、贴片
打开水浴锅,使水温维持在40-45℃,另准备30%乙醇溶液。
② 切片时,将一碗30%乙醇溶液放于切片机旁的桌面上。
② 用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带,放在乙醇溶液的水面上,使切片展开。(可省)
③小镊子轻轻地将连在一起的切片分开,用一个载玻片将切片完整,已展开的切片捞至温水中,使之充分展开。
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假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗1体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗1体和酶标抗1体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab")或Fab片段作酶结合物的***,酶联******盒厂家,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA***是否受RF的影响,已被列为这类***的一项考核指标(参见6.2)。
双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
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