武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
实验目的
植物细胞和***培养的技术性强,要求无菌操作,通过本实验可初步掌握常规的***培养技术,加深对无菌操作的了解。
二.实验原理
植物的性:植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力,称为植物的性。
植物***培养就是利用植物的性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物***培养按其原始意义,就是指愈伤***培养。但发展至今,其范围日益扩大,已包括植物和它的离体器1官、***、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此,拥有几种不同水平的培养技术,即整体的、器1官的、***的、细胞的和原生质的培养技术。
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12.水洗
用自来水流水冲洗约15min。使切片颜色变蓝(或放入碱性水中也可),但要注意流水不能过大,以防切片脱落。
13.分化
将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色,约2秒至数十秒钟。见切片变红,颜色较浅即可。
14.漂洗
切片再放入自来水流水中使其***蓝色。
15.脱水Ⅰ
切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各5min。
16、复染
用0.5%伊红乙醇液对比染色1-3min。
伊红主要染细胞质,着色浓淡应与苏1木1精染细胞核的浓淡相配合,如果细胞核染色较浓,细胞质也应浓染,以获得鲜明的对比。反之,如果细胞核染色较浅,细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染,促使细胞质容易着色,并且经乙醇脱水时不易褪色。
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④ 另取洁净的载玻片,捞起展开的切片,使其位于切片1/3处,另一端(磨边,粗糙的一端)磨面上标记或贴上标签,放于切片架上。
10. 脱蜡复水
将温箱温度调至65℃,待温度控制在60℃时,将切片连同切片架放入干燥的温箱内3-5小时至蜡熔化。
之后,elisa***盒,石蜡切片经脱蜡透明Ⅰ、Ⅱ脱蜡各20min,勿动(防治***掉)此步为关键步,请轻拿轻放。然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各5min
11. 染色
切片放入苏1木1精中染色约10-30min。
染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低,适当缩短或延长。室温高时促进染色,染色时间可短些,否则可适当延长时间,冬季室温低时可放入恒温箱中染色。
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