武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗1体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗1体和酶标抗1体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab")或Fab片段作酶结合物的***,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA***是否受RF的影响,已被列为这类***的一项考核指标(参见6.2)。
双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
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3、染色弱 原因 解决办法 抗1体浓度过低,孵育时间过短 提高抗1体浓度,孵育时间不能少于60分钟 ***超过有效使用期 及时更换*** 操作中,滴加***时缓冲液未沥干,致 使***稀释 每步滴加***前沥干切片中多余的缓冲液(但防止切片干燥) 室温太低,低于15℃ 若室温低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟(或4℃冰 箱过夜) 蛋白封闭过度 封闭时间不要超过10分钟 4、染色阴性 原因 解决办法 操作步骤错误 重新试验,设立阳性对照 ***中无抗原 设立阳性对照片,以验证实验结果 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗与二抗种属无误
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3. 洗涤
材料经固定后,PBS或双蒸水冲洗约3小时。(20,30,30,60)
4. 脱水
材料依次经80%、90%、100%、100%各级乙醇溶液脱水,各30min
注意事项:
(1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行,防止吸收空气中的水分。
(2)在更换高一级的脱水剂时,酶联******盒现货,1好不要移动材料以免损坏,可用吸管吸出器皿中的脱水剂,再用吸水吸尽器皿内剩余液,然后于皿中加入高一级脱水剂。
(3)在低浓度酒精中,每级停留不宜太长,否则易使***变软,助长材料的解体。
(4)在高浓度或纯酒精中,每级停留的时间也不宜太长,否则会使***变脆,影响切片。
(5)如需过夜,应停留在80%酒精中。
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