反相色谱(RPC)是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶1剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。与HIC一样，RPC中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非极性基团所覆盖，表现出强烈的疏水性。对于这种情况，要突出“预防为主”如：液相色谱使用人员要相对固定和稳定，工作中合理搭源，每台机一周至少一次实验，如长期不用起码每周要冲流动相2小时。因此，必须用极性有机溶1剂或其水溶液进行溶质的洗脱分离。溶质在反相介质上的分配系数取决于溶质的疏水性，一般疏水性越大，分配系数越大。当固定相一定时，可以通过调节流动相的组成调整溶质的分配系数。RPC主要应用于相对分子质量低于5000，特别是1000以下的非极性小分子物质的分析和纯化，也可以用于蛋白质等生物大分子的分析和纯化。由于反相介质表面为强烈疏水性，并且流动相为低极性的有机溶1剂，生物活性大分子在RPC分离过程中容易变性失活，所以，以回收生物活性蛋白质为目的时，应注意选用适宜的反相介质。
液相色谱仪是属于易学难用的仪器，特别讲究“正确使用”和经验。液相工作者接触多的是流动相，流动相也是造成液相色谱各种问题的主要源头。液相色谱常见的故障一是堵，二是漏。下面就这两分别展开讨论（流动相以甲1醇为例，色谱柱以C18为例） 。
为何会堵?
“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是***。
如果流路管中真漏气了怎么办？
建议是用外力使管路中充满液体。
具体如下：
1、找到流路管进入输送泵的接头。
2、拧下来。
3、用一干净洗耳球的尖1端对准管路的平整切口。
4、吸液体，看液面从流动相瓶里上升，至离洗耳球5cm左右时停止该动作。
5、快速把接头拧回输送泵上（这个过程可能会有少许流动相外泄，这是正常现象）。
6、开机，开排液阀门，启动输送泵。
7、等排液管中流出的溶液没有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常工作。
输送泵和柱子：这些部分进了气泡一般不怕，冲掉就行。
