Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)是目前常使用的改良式Eagle"s培养基。DMEM与MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。主要用于快速生长的细胞,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种。DMEM含更高浓度的NaHCO3,要用10%的CO?来平衡,当然也可以在较低CO?浓度下使用。DMEM-高糖(标准型)更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的培养,也可用于杂交瘤中瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
支原体染预防,俗话说,预防胜于治,所以操作的器材与环境消毒也至关重要:1.超净工作台预防,BI也提供Pharmacidal (货号: IC-110100)作为相应的处理***,Pharmacidal可有效预防***(和孢子),***(和孢子),支原体和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生长和污染。Pharmacidal不需稀释,每次使用超净工作台前或每天喷洒一次台面,二氧化碳培养箱每两周一次喷洒消毒,喷洒后让其自然风干,无需擦拭。
细胞***的常见表现:1.细胞生长缓慢 :细胞周期缓滞或是停滞都是***细胞的基本特征,此时细胞周期主要停滞于G1期。2.表面分泌物会增多:细胞***时显微镜下可见小黑点,但是小黑点增加,也有可能与培养条件如pH,生物污染等有关。3.细胞形态改变:如细胞体积增大、细胞扁平、胞核与核仁体积增加,如果是贴壁细胞,其细胞表面会明显观察到比较脏,运用常规HE染色结果会发现,细胞表面有很多附着的脏物,细胞形态与刚开始培养的细胞外观明显不同,像是上皮细胞等可能会出现很多梭状形态,且细胞质突起等形状异常细胞。
提高多肽稳定性的途径:添加剂 :通过加入添加剂,如糖类、多元醇、明胶、氨基酸和某些盐类,可以提高多肽的稳定性。糖和多元醇在低浓度下迫使更多的水分子围绕在蛋白质周围,因而提高了多肽的稳定性。在冻干过程中,上述物质还可以取代水而与多肽形成氢键来稳定多肽的天然构象,而且还可以提高冻干制品的玻璃化温度。此外表面活性剂如SDS、Tween、Pluronic,能防止多肽表面吸附、聚集和沉淀。