如何避免细胞抱团?1,用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。2,对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能大限度地将胰酶对细胞的损伤降到低,保证细胞的状态能够优。3,消化过程中不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。
CFSE是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有细胞膜通透性,能够自由进入细胞;当CFSE扩散穿过细胞膜,会与细胞内源酯酶产生水解反应而被激发,发出绿色荧光,这些带荧光的CFSE会进一步与细胞骨架蛋白结合,形成稳定的胞内荧光蛋白。每当细胞进行分裂增殖,胞内荧光蛋白会被平均分配到下一代细胞中,因此细胞荧光强度会随着增殖代数增加而不断地降低,可用流式细胞仪进一步侦测分析得出细胞分裂增殖的情况。CFSE的浓度,对于终判断细胞增殖结果有直接性的影响!
细胞***的常见表现:1.细胞生长缓慢 :细胞周期缓滞或是停滞都是***细胞的基本特征,此时细胞周期主要停滞于G1期。2.表面分泌物会增多:细胞***时显微镜下可见小黑点,但是小黑点增加,也有可能与培养条件如pH,生物污染等有关。3.细胞形态改变:如细胞体积增大、细胞扁平、胞核与核仁体积增加,如果是贴壁细胞,其细胞表面会明显观察到比较脏,运用常规HE染色结果会发现,细胞表面有很多附着的脏物,细胞形态与刚开始培养的细胞外观明显不同,像是上皮细胞等可能会出现很多梭状形态,且细胞质突起等形状异常细胞。