细胞老化的表现:细胞折光性变差,镜下可见细胞“变薄”,做转染实验时,细胞死率会较高。但培养液不会发生迅速变黄的现象,仍清亮。(但如果是***污染的话,一般会出现培养液的迅速变黄,混浊,镜下可见大量繁殖的***;若是支原体污染的话,细胞也会失去正常形态,会有细胞的死)。细胞的贴壁性减弱,开始有细胞漂浮于培养液中。
结合BI生产的基础培养基,Minimal Essential Medium是基本的培养基, 设计之初是为了培养HeLa细胞以及部分哺乳类的成纤维细胞。MEM含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种***,适合多种细胞单层生长。以MEM为基础,Stanner利用Earle"sBalanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)进一步配制成MEM-Alpha培养基,可广泛用于哺乳动物细胞的培养。
如何避免细胞抱团?细胞生长密度不要太高,70%-80%就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现成层生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团的就越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。
多肽的稳定性研究,引起多肽不稳定的原因:(1)脱酰胺反应 :在脱酰反应中,Asn/Gln 残基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脱酰胺反应的进行。在Asn-Gly-结构中的酰胺基团更易水解,位于分子表面的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解。(2)氧化:多肽溶液易氧化的主要原因有两种,一是溶液中有过氧化物的污染,二是多肽的自发氧化。在所有的氨基酸残基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等易氧化。氧分压、温度和缓冲溶液对氧化也都有影响。