Pfu DNA polymerase

Pfu  DNA  polymerase

Pfu  DNA  polymerase是目前已知DNA合成准确性***高的酶。在正常的PCR扩增程序下，其扩增产物的错误率为4000bp中发生一个。错误率仅为Taq DNA polymerase的1∕7--1∕10。Pfu DNA polymerase的耐高温性亦优于Taq DNA polymerase，变性温度可高至98℃（此时必须加矿物油以免反应组分蒸发）以扩增GC含量较高的模板。

通常Pfu DNA polymerase的扩增程序为：

变性温度   94℃－98℃， 5－10分钟

变性温度   94℃－98℃， 15秒－2分钟

复性温度   40℃－68℃， 30秒－2分钟

延伸温度   68℃－75℃， 扩增速率1分钟1Kb，根据目的片断长度另加15秒至1 分30秒, Pfu DNA polymerase的***适温度在74℃左右。

扩增25到35个循环。

注意事项:

1. Pfu DNA polymerase由于具有校正功能，DNA合成速率慢于 Taq DNA polymerase，同时所需的dNTP量一般要高于 Taq DNA polymerase，一些小公司的dNTP浓度往往低于其标定值有时甚至要低一倍左右，导致Pfu DNA polymerase的扩增失败。

    2. Pfu DNA polymerase产生的片断为平末端，不能直接用于T－载体***，可用Taq DNA polymerase加A末端后再用于T－载体***或直接在引物的5’端设计合适的酶切位点，酶切后再***到相应酶切载体。

    3. 保存在－20℃。    本产品Pfu DNA polymerase 的Storage buffer组分为：50mM Tris－HCL（pH8.2 at 25℃），0.1mM EDTA,  1mM DTT，50%甘油，0.05% CHAPS；

10X Reaction buffer with MgSO4的组分为： 200mM Tris－HCL（pH8.8 at 25℃），100mM KCL，100mM (NH₄)₂SO₄, 20mM MgSO₄, 1.0% Triton X-100, 1mg/ml BSA。