什么是荧光显微镜?
荧光显微镜也是光学显微镜的一种,主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。
荧光显微镜是荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
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荧光显微镜的工作原理
光源多采用200W的超高压灯作光源,它是用石英玻璃制作,中间呈球形,工作时由两个电极间放电,引起蒸发,球内气压迅速升高,当完全蒸发时,可达50~70个标准大气压力,这一过程一般约需5~15min。超高压灯的发光是电极间放电使分子不断解离和还原过程中发射光量的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光,足以激发各类荧光物质,因此,为荧光显微镜普遍采用。
超高压灯也散发大量热能。因此,灯室必须有良好的散热条件,工作环境温度不宜太高。
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荧光显微镜的标本制作要求
1、载玻片
载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间,太厚的坡片, 一方面光吸收多,另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁,厚度均匀,无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。
2、盖玻片
盖玻片厚度在0.17mm左右,光洁。为了加强激发光 ,也可用干涉盖玻片,这是一种表面镀有若干层对不同波长的光起到不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片,它可以使荧光顺利通过,而反射激发光,这种反射的激发光可激发标本。
3、标本
***切片或其他标本不能太厚,若太厚激发光大部分消耗在标本下部,而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外,细胞重叠或杂质掩盖,影响判断。
4、封裱剂
封裱剂常用甘油,必须无自发荧光,无色透明,荧光的亮度在pH8.5~9.5时较亮,不易很快褪去 。
5、镜油
一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时,必须使用镜油,尽量使用无荧光镜油,也可用上述甘油代替,液体石蜡也可用,只是折光率较低,对图像质量略有影响。
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