注意事项
除前面过程中附加的注意事项以外，还需注意：
1、操作玻片的过程中要小心，以免玻片碎裂；
2、处理好的玻片立即照相，时间长了细胞容易干掉导致形态发生改变；
3、摄取照片时，紫外照射时间尽量短以免荧光淬灭；
4、实验完毕后清理实验台面，将载玻片清洗后用75%酒精浸泡，以备回收使用。
蛋白亚细胞***主要有两种方法，一种是结果准确但费时费力的实验验证方法，如荧光蛋白标记与Western/SDS-PAGE等；第二种方法是通过生物信息学手段，借助计算机对蛋白的亚细胞***信息进行预测，这种方法可以在短时间获得大量蛋白的预测信息，而我们今天介绍的是便是第二种方法。目前常用的亚细胞***分析软件主要采用三种分析策略：N端排序或信号分子序列分析；4）用针头在植物叶片上避开叶脉扎孔，用无针头将侵染菌液从扎孔处***至植物叶片内。氨基酸序列组成分析；结合多种策略（N端信号序列，氨基酸序列组成，功能域，相似度，GO分类）的分析。
蛋白质亚细胞***的工具现在已经很了，但是基本的理论近年来没有重大突破，预测结果也需要实验验证。比较好的工具有ProteomeAnalyst (个人感觉较准的，但是有些蛋白预测不出来)，pTarget，WolfPsort，Nucleo（针对核***），TargetP。不同工具特性也不太一样。在体内，关键酶的活性受到代谢物(包括ATP，ADP)和(如胰岛素和胰素)等的周密调控。可以参考一下工具的发表时间和发表杂志的分量，然后把各种工具的结果综合一下。
原理：构建编码目bai标蛋白和荧光蛋du白的融合蛋白的载体，转染细胞，表zhi达，然后激光共聚焦显微镜dao观察荧光信号所在位置，即可知道该蛋白的亚细胞***。注意做空载荧光蛋白的对照。
具体步骤：构建目标蛋白与GFP的融合蛋白的瞬时表达载体，***枪轰击洋葱内表皮细胞，或化学（PEG）转化原生质体，瞬时表达后用荧光显微镜观察荧光位置，当然激光共聚焦图片会更漂亮。