细胞转染服务

技术简介:

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（***转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新***抗性***），潮***B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。
     转染技术的选择对转染结果影响也很大，许多转染方法需要优化DNA与转染***比例，细胞数量，培养及检测时间等。

 

技术服务：

磷酸钙转染

      磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法，磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与***表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入***，被转染的DNA可以整合到***的染色体中从而产生有不同***型和表型的稳定***。这种方法首先由Graham和van der Ebb使用，后由Wigler修改而成。可广泛用于转染许多不同类型的细胞，不但适用于短暂表达，也可生成稳定的转化产物。

      该法不适用于原代细胞（所需的DNA浓度较高），操作简便但重复性差。在实验中使用的每种***都必须小心校准，保证质量，甚至偏离***优条件十分之一个pH都可能导致磷酸钙转染的失败。而且对于有些细胞不适用。

 

脂质体转染

      脂质体为人工膜泡，可作为体内，体外物质转送载体。将需转移的DNA或RNA包裹于质脂体，由于质脂体具有磷脂双层与胞膜相似，因此，可与细胞膜融合，将DNA转入宿主细胞。

      影响转染效率差异的主要原因是细胞系间个体的差异，有的细胞系细胞膜通透性较好，质脂体复合物较容易进入细胞，转染效率就高。又有的细胞系本生就不容易被转染。其次脂类与DNA形成易于转染结构的特性存在***效应。其中主要的问题是毒性，表现为细胞聚集在一起，从壁上脱落。另为脂质体转染易于受到***中的脂肪与脂蛋白以及细胞外基质中带店成分，如******素等干扰引起细胞***从而影响转染效率。

 

 

客户方需提供：

1．生长状况良好的宿主细胞株，一并提供细胞特性，培养条件及相关注意事项。

2．我们也可以为客户代为购买细胞并且提供冻存保种服务，客户需要随时邮寄。

3．提供质粒，并说明质粒大小，浓度，抗性，拷贝数等相关背景资料。

 

 

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上海闪晶分子生物科技有限公司

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