蛋白表达与纯化

蛋白表达与纯化技术服务 --***低3000.00/蛋白，***！

步骤1. 目标***全***合成：

1. 从***库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
3. 合成设计好的***序列。

提供给客户：目标***（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。
价格：3.80元/碱基,如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用．
时间：2~3周，根据***的大小而定.详见全***合成服务
步骤2. 目标***亚***：

1. 扩增并抽提含有目标***的载体质粒。
2. 将目标***亚***到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 闪晶生物免费提供如下表达载体：

提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
价格：免费　
时间：1-2周
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：

1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到***的E.Coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性***于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单***菌株用于目标蛋白的表达。
5. 可提供表达菌株：DH5α, ***0, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
价格：免费
时间：1周
步骤4. 目标蛋白表达及纯化：

1. 摇瓶培养1L重组***，诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制***终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

提供给客户：纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。
价格：
1. 如果目标蛋白含有亲和标签（His-tag or GST-tag）
5,000元（目标蛋白纯度>80%，不切除标签）
5,500元（目标蛋白纯度>90%，不切除标签）
6,000元（目标蛋白纯度>80%，切除标签）
6,500元（目标蛋白纯度>90%，切除标签）
2. 如果目标蛋白不含有亲和标签
8,000元（目标蛋白纯度>80%）
9,000元（目标蛋白纯度>90%）
3. 如果没有获得目标蛋白，则不收取任何费用(仅限客户直接提供构建好的质粒时)。

时间：2~3周
备注：
1. 因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同，我们***终根据实际情况将给客户提供***少1mg，***多10mg的目标蛋白，所收取的费用是相同的。
2. 我们提供的***终产品一般为保存于常规的缓冲液（Tris-HCl，PBS或***-***钠缓冲液）中蛋白质溶液，并且其中不含有尿素或盐酸胍等变性剂。
3. 每次Western blot检测***多7个样品，因为要加入阳性对照，阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测，如果需要更多次检测则费用为1500元/次。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗，如果客户需要使用其他一抗，则需要客户提供。详见 Western Blot 检测服务.

其它相关技术服务
多******制备服务
荧光定量PCR检测服务
多肽合成服务
ELISA检测服务
 

  详情请登入  http://.cn 或来电  021-54460832 E-mail: lou800624@     

Gensynthese Taq DNA Polymerase Taq Polymerase
Gene Synthesis DNA Synthese
Peptide Synthesis

全***合成 ***合成 密码子优化   多肽合成

细胞培养 细胞转染 细胞稳转 细胞瞬转

***印迹 western blot 蛋白质印迹

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