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上海瑞基生物科技有限公司

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瑞基生物科技有限公司www.realgene.com.cnRealGene是一家致力于发展成为生物医药研发外包服务公司。坐落在上海闵行区,紫竹科技园;毗邻上海交大、华东师范大学,及国际知名跨国公司,学术氛围浓郁,具有得天独厚的人文环境。瑞基拥有1400平方实验大楼,配备有齐全的研发、实验设备,以满足......

细胞培养与转染服务

产品编号:2936776                    更新时间:2020-08-15
价格: 来电议定
上海瑞基生物科技有限公司

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  • 主营业务:蛋白服务,基因服务,分子生物试剂服务
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产品详情
细胞培养与转染服务

服务内容:
1.培养大量状态良好的细胞用于后续实验。
2.负责将客户所购买的细胞冻存保种与本实验室,实验完成后客户可以要求回寄细胞。
客户要求及实验周期
1.客户购买细胞邮寄与我们培养
客户必须提供状态良好的细胞我们才能够顺利快速地进行实验。因为在邮寄过程中细胞受温度与营养缺失等因素影响很大,收到细胞时很可能细胞已经全部***或已经污染,这样需要客户再次邮寄细胞,邮寄细胞在三次以内。
2.我们也可以为客户代为购买细胞并且提供冻存保种服务,客户需要随时邮寄。
3.如要培养的为具有确定目的***的细胞株,需要提供其中相关目的***的信息。收到细胞后我们也会及时检测目的***表达情况,如果没有目的***表达客户需要重新提供细胞,出现此情况实验推后我们不负相关责任。
4.客户邮寄细胞时需一并提供细胞培养条件及相关注意事项。
5.培养周期在3-7天(视细胞类型及生长情况而定)。
MTT实验技术服务
MTT方法简介:
四甲基偶氮唑盐比色法(MTT方法),是通过快速简便的颜色反应来检测细胞存活数量。其原理是MTT可作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有***存在时,线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡***的MTT还原成蓝紫色的针状甲瓒(Formazan)结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联***检测仪在570nm波长处测定其吸光度OD值,OD值的高低可间接反映***的数量及其活性。
目前MTT法常用于以下几个方面的研究:
1、检测细胞活性:常作为细胞毒性试验的一种方法。
2、体外***敏感实验:该方法简便、经济、快速,重复性好,所需的细胞数较少,没有***性,目前广泛的用于临床前的******的筛选研究。
3、一些***活性的研究
基本实验步骤:
(1)将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为1-10×104个/ml的细胞悬液,按1000-10000个细胞/孔接种于96孔板,每孔加100μl。
(2)将平板置37℃、5%CO2湿度培养箱中24小时后,加入含有不同浓度受试样本的培养液100μl,每个样本不同浓度设平行的三个孔,对照组加不含样本的培养液100μl,再放入培养箱中孵育24-72小时.
(3)用快速翻板法倒掉培养液,每孔加入用无***1640按5mg/ml新鲜配制的MTT溶液100μl,温育4小时,使MTT还原为甲瓒,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亚砜)200μl,用平板摇床摇匀后,使用***测定光密度值(OD)(检测波长570nm),以溶剂对照处理细胞为对照组,按下述公式计算化合物对细胞的***率,并按中效方程计算半数***浓度IC50。
客户方需提供:
样本描述,相关的实验设计内容如细胞类型,作用时间和样本浓度等。
实验周期与费用:
实验费用以样本数和细胞株的种类数目为单位计算,实验周期为20个工作日,公司将在材料和预付的实验经费全部到位的工作日后30个工作日之内提交实验结果
细胞转染服务
技术简介:
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(***转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染,外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新***抗性***),潮***B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
   转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA与转染***比例,细胞数量,培养及检测时间等。
技术服务:
磷酸钙转染
磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法,磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与***表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入***,被转染的DNA可以整合到***的染色体中从而产生有不同***型和表型的稳定***。这种方法首先由Graham和van der Ebb使用,后由Wigler修改而成。可广泛用于转染许多不同类型的细胞,不但适用于短暂表达,也可生成稳定的转化产物。
该法不适用于原代细胞(所需的DNA浓度较高),操作简便但重复性差。在实验中使用的每种***都必须小心校准,保证质量,甚至偏离***优条件十分之一个pH都可能导致磷酸钙转染的失败。而且对于有些细胞不适用。

脂质体转染
脂质体为人工膜泡,可作为体内,体外物质转送载体。将需转移的DNA或RNA包裹于质脂体,由于质脂体具有磷脂双层与胞膜相似,因此,可与细胞膜融合,将DNA转入宿主细胞。
影响转染效率差异的主要原因是细胞系间个体的差异,有的细胞系细胞膜通透性较好,质脂体复合物较容易进入细胞,转染效率就高。又有的细胞系本生就不容易被转染。其次脂类与DNA形成易于转染结构的特性存在***效应。其中主要的问题是毒性,表现为细胞聚集在一起,从壁上脱落。另为脂质体转染易于受到***中的脂肪与脂蛋白以及细胞外基质中带店成分,如******素等干扰引起细胞***从而影响转染效率。
客户方需提供:
1.生长状况良好的宿主细胞株,一并提供细胞特性,培养条件及相关注意事项。
2.我们也可以为客户代为购买细胞并且提供冻存保种服务,客户需要随时邮寄。
3.提供质粒,并说明质粒大小,浓度,抗性,拷贝数等相关背景资料。

- Email: info@.cn;
- 电话: +86-21-54460771 (手机): +86-152 2118 0720
- 传真: +86-21-54460772


 

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